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      一文看懂什么是逆转录病毒包装服务

      发布日期: 2021-12-24
      浏览人气: 92
         相信有很多小伙伴会好奇逆转录病毒包装服务是用来干嘛的呢?下面跟着小编一起去看看吧!病毒载体是人为调节细胞内或机体内基因表达常用的方式之一,通过病毒感染的方式可以将外源的基因片段稳定整合到宿主细胞基因组内,从而达到持续、稳定的表达外源基因的目的。
        
        什么是逆转录病毒包装服务
        10cm大皿接种5×106个Plat-E细胞,加入10ml含10%FBS的DMEM培养基过夜,12h后显微镜下观察细胞密度80%-90%为宜。15ug目的质粒和500ulOpti-MEM培养基混合,同时45ug转染试剂和500ulOpti-MEM培养基混合,5min后转染试剂Opti-MEM加至质粒Opti-MEM中,静置20min,将混合物滴入Plat-E细胞中混匀,37℃5%CO2培养箱中培养,8-10h后更换新鲜DMEM培养基。转染48h,72h后收集病毒上清,0.44um滤器过滤-80℃保存。
        
        慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种,它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞,如原代细胞等,并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中,从而大大增加了转染效率,并且能够在细胞系中稳定表达若干代,可以进行稳转细胞株的筛选。因为是随机整合,也有不确定因素,有些公司还能提供定点整合技术,将靶基因定点整合到基因组特定的部位,从而保证其高效表达并且对细胞不产生随机整合可能产生的伤害。
        
        慢病毒载体基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生RNAi干扰。
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