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      一文读懂酶联免疫吸附实验的概念及原理

      发布日期: 2022-01-17
      浏览人气: 78
         酶联免疫吸附实验是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。
        
        一、基本概念
        1、免疫:笼统地概括起来,免疫就是人和动物机体防御、排除外来物质(异物)进人体内,同时识别和清除体内死亡、变性物质和平定体内叛乱分子突变细胞,以保护和稳定自身的防护机制。
        2、抗原:抗原是指那些能够诱导机体的免疫系统发生免疫应答,产生抗体和致敏效应淋巴细胞,并在体内外与之特异性结合,发生免疫反应的物质。
        3、抗体:是能与相应的抗原专一性结合的蛋白质分子,和机体其他生物大分子一样是细胞的产物,分泌到体液中或表现在细胞表面上。
        4、抗原、抗体反应:抗原和抗体在体外的反应亦称血清学反应。这类反应可借助免疫学方法进行检测。
        
        二、酶联免疫吸附实验基本原理:
        ①抗原或抗体能吸附到固相载体表面,并保持其免疫学活性;
        ②抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性;
        ③酶标抗体与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例。
        以鸡败血支原体(Mg)抗体检测为例:试验用Mg抗原包被96孔板。被检样品加入包被孔后的孵育阶段,血清样品中的特异性Mg抗体与包被的抗原反应形成复合物,经过洗涤,为结合的物质被洗掉,微孔加入酶标抗体,酶标抗体可以与吸附在包被孔内的鸡抗体结合。反应后进行洗涤,为结合的酶标抗体被洗去。加入酶底物后的颜色反应与血清中的Mg抗体的数量直接相关。
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