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      產品名稱:

      cDNA文庫構建

      產品價格:
      廠商性質: 工程商 產品時間: 2020-11-09
      cDNA文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部mRNA經反轉錄形成的cDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。標準cDNA文庫構建的基本原理是用 Oligo(dT)作逆轉錄引物,或者用隨機引物,給所合成的cDNA加上適當的連接接頭,連接到適當的載體中獲得文庫。
       文庫構建流程

      1.       樣品QC

       

      2.       從總RNA中分離mRNA(原始文庫將采用至少2 µg mRNA進行構建)

       

      3.       以帶有NotI酶切位點的oligo(dT)Linker Primer為反轉錄引物,再在雙鏈cDNA的5’端加SalII adaptor

       

      4.       NotI酶切、過柱去除小片段

       

      5.       將合成的雙鏈cDNA與載體進行連接,連接產物轉化DH10B感受態細胞

       

      6.       cDNA文庫的QC:檢測庫容量(重組子克隆數目);隨機挑取30個克隆子進行PCR鑒定和雙向測序分析,檢測含插入片段的克隆子比例,檢測平均插入片段大小

       

      客戶提供

       

              注明樣品的種屬,收集樣品后,應將樣品立即置于干冰保持低溫運輸。

       

      我們提供

       

             含有文庫的甘油菌和質量分析鑒定報告

       

      質量保證

       

            文庫含有至少4 x 106個原始克隆

       

             樣品平均插入片斷保證大于1.0 kb

       

           有超過85%的載體含有插入片段

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